تهیه ی بلور DNA

مقاله ای با عنوان زیر در مورد تهیه بلور DNA جلب توجه نمود:

به منظور بررسی شیار اصلی در Z-DNA.بلور های کوچک از یک اولیگونوکلئوتید سنتتیک تهیه و به وسیله انتشار بخار(Vapor Diffusion )  با استفاده از دو روش قطره آویزان(hanging drop method  )   و قطره نشسته(sitting drop method )  بلور ها رشد داده شدند و با قرار دادن بلور ها در لوله های سیلیکون و با استفاده از مطالعات نوترونی به بررسی بلور ها پرداختند.*

برای تهیه بلور از یک ماده چند کار بایستی انجام گیرد 1-خالص سازی آن ماده وتهیه بلور کوچک از آن ماده

 2-رشد بلور آن ماده

برای خالص سازی یک ماده از روش های متعددی  استفاده می شود .

جذب سطحی –سانتریفیوژ -کروماتوگرافی-بلور سازی-تبخیر-تقطیر-خشک کردن-الکتروفورز-تبلور مجدد-رسوب سازی-یخ زدن جز به جز-تقطیر جز به جز-صاف کردن-تصعید- و...در انواع گوناگون روند های جداسازی مخلوطی از ماده اصلی و ناخالصی وجود داردکه در مقادیری از حلال حل شده اند.**

 

روش بسیار شایع برای بلور سازی  استفاده از تبخیر(Vapor Diffusion ) می باشد.این روش خود به دو صورت قطره آویزان(hanging drop method  )  و قطره نشسته(sitting drop method ) قابل اجرا می باشد.در هر دو  روش نیاز به یک قطره حاوی آن ماده خالص(پروتئین یا DNA) وبافر و رسوب دهنده میباشد این مواد بایستی  با یک ظرف بزرگ حاوی بافر های مشابه و رسوب دهنده مشابه در غلظت های بسیار بالاتر به حالت تعادل برسند.در ابتدا قطره حاوی آن ماده دارای غلظت مناسبی برای بلور سازی نمی باشد  اما همانطور که آب از قطره  بخار می شود و وارد ظرف می شود غلظت ماده راسب اقزایش می یابد تا به یک سطح مناسب برای بلور سازی برسد. از آنجائی که سیستم در حال تعادل است این حالات مناسب حفظ می شود تا زمانی که بلور سازی کامل گردد.تفاوت دو روش قطره آویزان و قطره نشسته در جهت گیری قرار دادن قطره حاوی آن ماده در سیستم می باشد.هر دو روش نیازمند یک سیستم بسته ای هستند  سیستمی که بایستی کاملا از هوای بیرون ایزوله گردد این کار به وسیله ظرف غیر قابل نفوذ و یا گریس باقدرت خلاء بالا بین سطوح قابل اجرا می باشد.***

روش قطره آویزان(hanging drop method ) ظرف محلول (آبی)معمولا حاوی بافر و ماده رسوب دهنده می باشد.محلول پروتئین (قرمز)حاوی ترکیبات مشابهی می باشد اما در غلظت های پائین تر.محلول آن ماده ممکن است همچنین حاوی فلزات نادر و یون های باشند که برای رسوب دادن مواد خاصی لازم باشند .به عنوان مثال مشخص شده که برای  رسوب انسولین و بلور سازی وجود فلز  روی ضروری می باشد. 

روش قطره نشسته(sitting drop method )

در این روش قطره حاوی آن ماده(پروتئین) بر روی یک ستون و در بالای ظرف محلول قرار دارد(بر خلاف روش قطره آویزان).

http://scripts.iucr.org/cgi-bin/paper?S174430910601236X

http://en.wikipedia.org/wiki/Separation_process

http://en.wikipedia.org/wiki/List_of_purification_methods_in_chemistry

http://www.bio.davidson.edu/COURSES/Molbio/MolStudents/spring2003/Kogoy/protein.html

SORCE:

http://www.groupbio.blogfa.com/post-257.aspx